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姓    名   张国忠 第 60 条
标    题   颜色反应
内    容   颜色反应有哪些
回    复   答案:1)双缩脲反应 原理:双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)是由两分子尿素缩合成的化合物。将尿素加热到180℃,则两分子尿素缩合,放出一分子氮。双缩脲在碱性溶液中能与CuSO4反应生成紫红色络合物,称为双缩脲反应。凡分子中含有两个以上-CO-NH-键的化合物都呈此反应。因为蛋白质分子中有很多与双缩脲结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应。 鉴别:反应呈粉红色或紫红色表明有结合态的蛋白质。 2)Millow(米伦)反应 原理:米伦试剂能与单酚、双酚和吲哚生物产生颜色,这些反应最初产生的有色物质可能是酚的亚硝基衍生物,经互变异构后成为颜色更深的邻醌肟,最终形成红色稳定产物。 鉴别:若有酚类蛋白质,则加入米伦试剂后产生白色蛋白质沉淀,加热后变成红色。(该反应不能用来测定尿中的蛋白质,试剂中的汞离子能被尿、无机盐所沉淀,使试剂失效) 3)Salkowski蛋白黄反应 原理:含有苯环结构的氨基酸,如酪氨酸和色氨酸,遇硝酸后,可被硝化成黄色物质,该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。该反应是芳香族氨基酸和含有酪氨酸、色氨酸的蛋白质所特有的呈色反应。多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸,所以有黄色反应;笨丙酸不易硝化,需加入少量浓硫酸才有黄色反应。 鉴别:加入浓硝酸变黄色后加碱变橙黄色表明其含有芳香族氨基酸。 4)茚三酮反应 原理:在加热条件下,所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质。此反应十分灵敏,根据反应所生成的蓝紫色的深浅,进行比色就可测定样品中氨基酸的含量,也可以在分离氨基酸时作为显色剂对氨基酸进行定性或定量分析。茚三酮反应分为两步:第一步是将氨基酸氧化形成CO2、NH3和醛,而水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所形成的还原型茚三酮和另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。此反应的适宜pH为4~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH值条件下的颜色深浅不同,如果反应液酸度过大甚至会不显色。与Asn Gln生成棕褐色物质 鉴别:若由淡黄色变为紫色。说明样品中含有蛋白质。 5)Hopkins-Cole乙醛酸反应 原理:含吲哚基氨基酸,如色氨酸以及含色氨酸的蛋白质,在浓硫酸中与乙醛酸(glyoxalate)反应形成紫红色物质。它的结构和性质还不很清楚,可能是醛与两分子色氨酸或其残基缩合,失水形成的靛蓝物质。NO3-,NO2-,ClO3-以及过多的Cl-干扰该反应。有微量CuSO4或Fe3+存在时,可以加强色氨酸的阳性反应。 鉴别:若生成紫红色物质,则表明含有色氨酸或含色氨酸蛋白质。 6)坂口反应 原理:含胍基的唯一氨基酸——精氨酸与α-萘酚在碱性次溴酸钠(或次氯酸钠)溶液中发生反应,产生红色物质。该反应灵敏度达1:2.50×105。它受到胍乙酸,甲胍和胍丁基胺等干扰。由于过量次溴酸钠缓慢氧化上述有色物质,α-氨基酸破裂,引起颜色消褪,必须加入浓脲溶液,破坏过量的次溴酸钠,以增加呈色反应稳定性。 鉴别:若反应呈红色则含有精氨酸。 7)巯基呈色反应 原理:含巯基氨基酸,如半胱氨酸在碱性条件下,与亚硝基铁氰化钠反应形成紫红色物质。胱氨酸经KCN还原成半胱氨酸后,也呈阳性反应。 试剂:10%NaOH:10gNaOH溶解于100mL水中; 5%亚硝基铁氰化钠溶液:5g亚硝基铁氰化钠溶于100mL水中。 方法:在点滴反应板上,各取样品2滴分别与3滴10%NaOH和0.5mL5%亚硝基铁氰化钠溶液混合,观察反应颜色。 鉴别:反应显紫红色表明有含巯基的氨基酸存在。 8)Ehrlich反应 原理:重氮化合物与含酚核或咪唑环氨基酸或蛋白质,如酪氨酸和组氨酸结合产生有色物质。酪氨酸呈不甚明显的橙红色;组氨酸呈鲜红色。它受到酪胺、组胺、肾上腺素和胆色素的干扰。 鉴别:若反应呈橙红色为酪氨酸,鲜红色为组氨酸。 9)pauly 反应 酪氨酸的酚基在3和5位上容易发生亲电取代反应,它也可以与重氮化合物(如对氨基苯磺酸的重氮盐)结合成桔黄色化合物,叫Pauly反应

姓    名   sos 第 59 条
标    题   1
内    容   根据下列资料推出某肽的氨基酸排列顺序。  1)完全酸水解得到Phe、Pro、Glu、(Lys)2、Met和NH3  2)用 FDNB试剂处理得到 DNP-Phe  3)用澳化氰水解此肽得到一个以高丝氨酸内酯结尾的二肽和一个四肽  4)用胰蛋白酶水解可产生两个三肽  5)用羧肽酶A或羧肽酶B处理都不能得到阳性结果
回    复   Phe-Met-Lys-Gln-Lys-Pro

姓    名   李 第 58 条
标    题   对角线电泳的原理
内    容   对角线电泳的原理
回    复   双向电泳:等电点和分子量大小 对角线电泳是测定肽链中二硫键位置用的。两向条件相同,所以肽段都在对角线上。不过中间用过甲酸处理了,所以原来有二硫键的肽段会偏离。 如果从理论上分类,对角线电泳应该属于特殊的双向电泳。 对角线电泳从理论上分析是一种特殊的双向电泳 对角线电泳最经典的用途当属二硫键的确定: 样品蛋白质经硫氧还蛋白处理后,利用荧光巯基探针标记巯基,目标蛋白会带上荧光探针。再进行对角线电泳时,如果发现目标蛋白存在分子内二硫键,则经处理后所得的点位于对角线的上方;如果目标蛋白存在分子间二硫键,则经处理后得到的点位于对角线的下方。 1966年Brown及Hartlay提出用对角线电泳进行含-S-S-肽的定位,此方法是将水解后的肽混合物进行第一相电泳,样品点在中间,电泳毕,将样品纸条剪下,置于装有过甲酸的器皿中,用过甲酸蒸气处理2小时,使-S-S-断裂,此时含-S-S-肽段的静电荷发生了改变。然后将纸条缝于另一张纸上,进行第二相电泳电泳,电泳条件与第一相相同,只是与第一次方向成直角。在第二相电泳中,那些不含-S-S-的电泳情况与第一相相同,因此电泳后各肽斑均坐落在纸的对角线上,而那些含-S-S-的肽由于被氧化,电荷发生变化,第二相电泳速度就与第一相不同,电泳结果这些肽斑就偏离对角线,肽斑可用茚三酮显示。对角线法由于其速度快,操作简便以及能用于小分子样品,是直接分离-S-S-肽的好方法。 暂未回复

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